史俊霞 凝胶过滤色谱法是体积排阻色谱法的一种,以水或者缓冲液为流动相;以有机溶剂为流动相的一般叫凝胶渗透色谱法。 两者都属于体积排阻色谱法(Size exclusion chromatography,SEC)。SEC是20世纪60年代发展的一种分离模式。它是根据空间结构不同的分子在多孔颗粒中的路径不同而进行分离。原理如下 01 原理 看完原理给我们就有了一个小的tips啦: tips 1 分子直径比大孔隙直径大的分子全部被排阻在凝胶颗粒以外,两种或两种以上的这样的分子不能达到分离效果。 tips 2 分子直径比小孔隙直径小的分子能全部进入凝胶颗粒内部,这样的两种或两种以上的分子也不能达到分离效果。 02 应用域 •单抗 •双抗 •ADC •融合蛋白 •血液制品 •重组白蛋白 •PEG蛋白 •多肽 辅料和残留分析 •吐温80/20 •聚乙二醇 •泊洛沙姆 •聚乙烯吡咯烷酮 食品化药域 •水溶性抗生素聚体分析 •乳品中乳白蛋白和乳球蛋白分离 •中药中吐温20/80 不同的样品由于空间结构不同,在同一根柱子上的排阻范围不同。参考选用跟标准品结构相近的排阻范围内的柱子。如下BIOBASIC系列SEC色谱柱的不同标准品的校准曲线如下: 生物药质控 •单抗 •双抗 •ADC •融合蛋白 •血液制品 •重组白蛋白 •糖蛋白 •PEG蛋白 •多肽 •多糖 •纤维素 生物药工艺监控 03 方法开发考虑因素 1、孔径分布 300Å vs 250Å 相近孔径分布的柱子,在检测同一个样品时,聚体与主峰或者主峰与片段的分离可能会存在比较大的差异。 2、粒径 (该数据来自于2020药典四部) 5 μm vs 10 μm 不同的粒径的相近孔径分布的柱子,分析需要的柱长和分析时间会有差异。 3、缓冲体系 CX-1 Buffer vs 磷酸盐缓冲液 缓冲体系中流动相的组成,pH值可能会改变蛋白的三维结构和折叠状态,进而影响单体,片段与聚体的分离。 4、盐浓度 由于包裹技术的差异,样品可能会跟色谱柱之间存在一些离子性吸附,这个时候,需要提高流动相中盐的浓度来屏蔽这种作用。Mabpac SEC 系列优异的包裹技术,可以在比较低的盐浓度下分析蛋白样品,进而用于Native 质谱方法开发。 仅仅给出方法开发tips怎么能表达我们的诚意呢,我们更推出了免费SEC做样的服务,快快扫描以下二维码或点击阅读原文报名参加吧: // 相关链接: ” 助力中国制“药”弯道超车、扬帆出海,ADC药物的全面表征 (一) //点击阅读 BIOBASIC SEC-120,只为更精细的抗生素分析 //点击阅读 // 参考资料: ” [1] 2020药典 [2]Technical Guide Biobasic SEC Columns [3]Complete characterization of a lysine-linked antibody drug conjugate by native LC/MS intact mass analysis and peptide mapping + + + + + 如需合作转载本文,请文末留言。 点击阅读原文也能报名哦~ 阅读原文 |